MKN1細胞（人胃腺鱗癌細胞系MKN1）
MKN1細胞是由日本研究者Hojo,H.等人于1977年從一位72歲日本男性患者的胃部原發(fā)性腺鱗癌組織中分離建立的一種細胞系。該細胞系是研究胃癌，特別是腺鱗癌這一特殊亞型的生物學特性和治療策略的重要體外模型。
細胞基本信息：
? JCRB編號：JCRB0252
? 組織來源：人胃（原發(fā)性）腺鱗癌
? 供體信息：72歲，日本男性
? 建立者：Hojo, H.
? 寄存者：Motoyama & Watanabe
? 寄存時間：1989年（寄存至JCRB年份）
? 特別說明：該細胞為經MC-210處理去除支原體的版本
細胞形態(tài)及生長特性：
? 細胞形態(tài)：上皮樣細胞
? 生長方式：貼壁生長
? 倍增時間：約30-36小時（不同批次略有差異，如LOT 03302009約30小時，LOT 01312012約35小時）
? 傳代比例：建議1:10稀釋傳代（例如將一瓶80-90%融合的T-25培養(yǎng)瓶細胞傳代至10瓶）
病毒污染檢測：
通過實時熒光定量PCR檢測病毒基因組片段，結果顯示常見病毒（包括CMV、EBV、HBV、HCV、HIV-1/2、HTLV-1/2、HPV18、BKV、JCV、ADV、HAV、parvoB19等）均為陰性。
培養(yǎng)基：
? 基礎培養(yǎng)基：90% RPMI-1640培養(yǎng)基
? 血清：10% 熱滅活胎牛血清（FBS）
? 培養(yǎng)條件：37°C，5% CO?
細胞培養(yǎng)注意事項：
1. 細胞復蘇與接種密度
解凍復蘇時，建議將整管細胞（約含1-3×10?個細胞）接種于T-25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿中，使用推薦培養(yǎng)基。初始接種密度建議在2 - 6.5 × 10? cells/mL范圍內（參考LOT信息），以確保細胞能順利進入對數生長期。
2. 傳代操作
? 消化：細胞生長至80-90%融合時進行傳代。吸棄舊培養(yǎng)基，用PBS(-)清洗一次后，加入0.25%胰蛋白酶 - 0.02% EDTA溶液，在37°C下消化約5-10分鐘。
? 終止與接種：待細胞變圓、部分脫落時，立即加入含血清的新鮮培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打制成單細胞懸液。按1:10的比例稀釋后接種至新培養(yǎng)瓶。
3. 換液頻率
常規(guī)培養(yǎng)時，根據細胞生長速度和培養(yǎng)基顏色變化（酚紅指示劑），通常每2-3天更換一次新鮮培養(yǎng)基。
4. 凍存方法
? 凍存液：BAMBANKER (LYMPHOTEC Inc., CS-02-001, NIPPON Genetics Co., LTD)。
? 凍存密度：推薦高密度凍存，建議每個凍存管內的細胞數不低于1×10? cells/mL。
? 凍存步驟：使用程序降溫盒（或逐步降溫法：4°C 30分鐘 → -20°C 1小時 → -80°C過夜）后，轉移至液氮中長期保存。
5. 支原體污染
該細胞系在JCRB保存過程中已進行過支原體去除和檢測，確保供應時無支原體污染。但培養(yǎng)過程中仍需嚴格遵守無菌操作規(guī)范，并建議定期自行檢測。
細胞特性：
? 腫瘤類型：來源于胃部的腺鱗癌。腺鱗癌是一種同時具有腺癌和鱗狀細胞癌成分的罕見胃癌類型，因此MKN1細胞是研究這種混合型腫瘤發(fā)生機制的寶貴模型。
? 基因特征：據相關文獻（如 PMID: 3095279），該細胞系可用于檢測胃癌細胞中擴增的DNA序列，提示其可能攜帶某些基因擴增，適合進行基因組不穩(wěn)定性和癌基因研究。
? 同工酶分析：經JCRB檢測，多種同工酶譜（如NP、G6PD、LD、AST、MD等）確認為人源，且G6PD為B型，排除了常見細胞交叉污染。
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參考文獻
1. Hojo H, Oboshi S. Establishment of cultured cell lines of human stomach cancer origin and their morphological characteristics. Niigata Igkkai Zasshi, 91: 737-752, 1977.
2. Nakatani H, Tahara E, Yoshida T, et al. Detection of amplified DNA sequences in gastric cancers by a DNA renaturation method in gel. Jpn J Cancer Res. 1986 Sep;77(9):849-53. (PMID: 3095279)
