在 ELISA 實(shí)驗(yàn)所需的簡單儀器中，搖床是個(gè)迷惑的存在，科研猿們經(jīng)常在是否需要使用中舉棋不定。大多數(shù)的 ELISA 實(shí)驗(yàn)是不需要使用搖床的，室溫孵育即可，但有些特殊的 ELISA 不但需要搖床，且有嚴(yán)格的使用參數(shù)。

在 R&D Systems? ELISA 試劑盒說明書中，其實(shí)早有答案，以 Human IL-6 Quantikine HS ELISA Kit（貨號(hào) HS600C）為例，操作流程（Assay procedure）部分中提到：

這里，建議使用 500 rpm，0.12" orbit 參數(shù)的搖床/振蕩器。

• 搖床長什么樣？為什么需要使用搖床？

眾所周知，實(shí)驗(yàn)室里通常有各種用途及規(guī)格的搖床，如用來培養(yǎng)細(xì)菌、動(dòng)物細(xì)胞及用于 Western Blot 抗體孵育的搖床等。

我們 ELISA 說明書中要求的搖床類似下圖，該搖床專為 96 孔板設(shè)計(jì)，軌道直徑 3 mm，轉(zhuǎn)速可達(dá)到 500±50 rpm，運(yùn)行時(shí)快速振動(dòng)，且頂部托盤有微孔板固定裝置，微孔板既不會(huì)松脫，也不會(huì)有液體飛濺。

如果在 ELISA 產(chǎn)品說明書中要求使用搖床，則必須使用，否則會(huì)影響抗原抗體的有效結(jié)合，導(dǎo)致待測孔的 OD 值偏低。

例如使用 Human/Mouse/Rat Activin A Quantikine ELISA Kit（貨號(hào) DAC00B），在未使用搖床時(shí)得到的標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值（450 nm 的測定值減去 570 nm 的測定值）異常（表 1）。

結(jié)果顯示，最高濃度（1,000 pg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)品平均 OD 值僅為 0.647，且 125pg/mL 標(biāo)準(zhǔn)品兩個(gè)復(fù)孔 OD 值相差較大，低濃度標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值無明顯梯度。因而無法保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。而在使用了搖床的實(shí)驗(yàn)中，標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值正常（表 2）。

• 是否必須使用指定參數(shù)的搖床？可以用其它規(guī)格代替嗎？

由于說明書中指定的軌道直徑 3 mm，轉(zhuǎn)速 500±50 rpm 的搖床是我們驗(yàn)證過的能保證準(zhǔn)確結(jié)果的搖床，而其它搖床，如 Western Blot 實(shí)驗(yàn)中使用的水平搖床軌道直徑較大，如果設(shè)置成 500rpm 就會(huì)轉(zhuǎn)速太快，容易造成微孔板內(nèi)液體飛濺、樣品孔污染，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

如果您希望使用其它規(guī)格的搖床嘗試，可進(jìn)行如下操作：

將適量體積的液體加入備用 96 孔微孔板，用封口膜覆蓋孔板；

調(diào)整搖床速度，讓液體劇烈振蕩，使其幾乎旋轉(zhuǎn)到微孔板的頂部，但不能形成氣泡或飛濺到封板膜上；

使用 R&D Systems? 的試劑盒做一次標(biāo)準(zhǔn)曲線，驗(yàn)證一下實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否可以接受。

但這種測試需要耗費(fèi)額外的孔板及時(shí)間，得不償失，所以最好還是根據(jù)說明書的建議選擇搖床。

小小的搖床，卻關(guān)乎實(shí)驗(yàn)的成敗。當(dāng)我們準(zhǔn)備開展實(shí)驗(yàn)時(shí)，不妨多研讀一番說明書，不要錯(cuò)過其中的細(xì)枝末節(jié)。

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